试剂盒选用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）。往预先包被活性氧簇（ROS）抗体的包被微孔中，顺次参加标本、规范品、HRP符号的检测抗体，通过温育并彻底洗刷。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的效果下转化成终究的黄色。色彩的深浅和样品中的活性氧簇（ROS）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），核算样品活性。

  1. 血清：运用不含热原和内毒素的试管，操作的流程中防止任何细胞影响，搜集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞敏捷小心肠别离。

  2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

  4. 安排匀浆：将安排参加适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

  5. 保存：假如样本搜集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，防止重复冻融，在室温下冻结并保证样品均匀地充沛冻结。

  1.试剂盒保存在2-8℃，运用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗刷液会有结晶，这归于正常现象，水浴加热使结晶彻底溶解后再运用。

  3.浓度为0的S0号规范品即可视为阴性对照或许空白；依照说明书操作时样本现已稀释5倍，终究成果乘以5才是样本实践浓度。

  20×洗刷缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗刷缓冲液加19份的蒸馏水。

  1.手艺洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗刷液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。

  1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩下板条用自封袋密封放回4℃。

  4.除空白孔外，规范品孔和样本孔中每孔参加辣根过氧化物酶（HRP）符号的检测抗体100μL，用封板膜封住反响孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

  5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗刷液，静置1min，甩去洗刷液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

  7.每孔参加停止液50μL，15min内，在450nm波利益测定各孔的OD值。

  制作规范曲线：在Excel作业表中，以规范品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，制作出规范品线性回归曲线，按曲线方程核算各样本浓度值

  1.准确性：规范品线性回归与预期浓度相关系数R值，不小于0.9900。

  1.试剂盒仅供研讨运用，不得用于临床实验或人体实验，不然所发生的全部结果，由实验者承当，本公司概不负责。

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