提了两个礼拜了，结果一直不理想，总是有很多问题。昨天用提取产物跑胶，师兄瞅了一眼，还以为我是在做 PCR！今天又做了一次，以为质量超好，其实是有 DNA 残留给我带来的错觉...

  RNA 这东西真的太让人心烦了，不稳定又不配合，每次提取都在不断下战书：RNA 降解、低产率、低纯度、DNA 污染，相信提取过 RNA 的你也一定遇到过。

  为了让大家能不再白白受苦，今天我们将为给大家伙儿一起来分享下 RNA 分离技巧，特别是最大限度地回收高质量、无 DNA 的 RNA 的实践经验。另外，我们也为大家准备了 TR205 小量总RNA 提取试剂盒试用福利，助大家的提取事半功倍！

  本方法无需传统 TRIZOL 提取方法的相分离，而且不需要用任何有毒有害的试剂（例如氯仿），无需沉淀过程，7 分钟就可完成整个操作步骤，并能提取到含 microRNA 的总 RNA。

  RNA 极易降解，非常不稳定。RNase 仿佛无处不在，只要稍不注意，样品中的 RNA 就会被快速降解。为了尽最大可能避免 RNase 的影响，需要中收集样本时，就做好必要的措施。常用的样品稳定方法有液氮快速冷冻、干冰乙醇浴或 -80 °C 冷冻室。然而，这一些方法也有缺点，比如核酸中冻融过程中可能会损伤。推荐通过以下两种方式来进行样本的处理：

  使用裂解缓冲液：将样品溶解中裂解缓冲液中，使 RNase 失活 (如 TRIzol、RNA 裂解缓冲液等)，处理后再将样品处理或冷冻保存；

  使用稳定试剂：将样品浸泡在稳定试剂中（如 DNA/RNA Shield），使核酸酶失活，并在环境和温度下长时间保护核酸。适用于实地收集样本或处理珍贵的病人样本（例如组织活检、全血等）。

  在 RNA 提取过程中，提高 RNA 产量和质量的最佳方法是保证样品完全裂解。然而，不用的样本需要针对性的设置裂解方案。例如，血细胞（如淋巴细胞、PBMCs 等）和微生物细胞往往很难有效溶解，仅仅添加基于洗涤剂的裂解缓冲液可能并不够。为了更好的提高裂解效果，可以将裂解缓冲液与机械裂解步骤（研磨珠破碎）匹配，或者在裂解液上游加入酶裂解步骤（如蛋白酶 K、溶菌酶等）（图 1）。

  图 1：从裂解缓冲液中提取大肠杆菌细胞的总 RNA，用研磨珠机械匀浆，而不是仅用裂解液进行裂解。在裂解液中进行机械均质化可产生稳定的 28 S/16 S 核糖体带和更高的核糖体完整性（RIN）。

  DNA 的存在会使基于 UV/VIS 的定量方法（如 Nanodrop）发生偏差，从而使得 RNA 的定量出现偏差，看着产量很高，但实际上 RNA 的量其实很少。在日常的实验里，可以将提取产物通过琼脂糖凝胶电泳来判断是不是真的存在 DNA 污染。当 28 S RNA 上方出现其他片段时，就说明产物中含有 DNA（图 2）。能够正常的使用 TRIzol 相分离、DNA 去除柱和 DNase 进行处理。

  图 2：用琼脂糖凝胶电泳显示人类上皮细胞的 RNA 谱。使用简石生物试剂盒提取的 RNA 没污染基因组 DNA

  每一步都如履薄冰的 RNA 提取，需要大家的认真和谨慎对待。为帮助大家更简单、高效的完成 RNA 的提取，简石生物开发了一种新型的配合 TRIZOL 使用的 RNA 提取试剂盒，该试剂盒具有新的缓冲液和离心柱体系，可以在提取 RNA的同时消除 DNA 的影响。极大简化流程的同时也更好的保证来 RNA 的提取质量，让你的实验不再有烦恼。