做科研，哪有不提核酸的？组会上大家盘点哪些样本的核酸最难提，10 年核酸提取经验的师兄道出答案：

  小小的 DNA 里蕴含大量信息，不仅对新鲜样本，对于固定、石蜡包埋（FFPE）的肿瘤患者标本研究来说，依旧很重要。但是固定使得组织中的 DNA 之间、DNA 与蛋白质、RNA 等发生随机交联并使得 DNA 降解，石蜡包埋过程又加速了 DNA 降解。于是乎 FFPE 的核酸提取常常得率低，很困难！下游的 PCR 及高通量测序，更是难上加难！

  本文梳理了 FFPE DNA 提取时，5 个注意点，操作不当有几率会使核酸得率较低。如果你对 FFPE 自信满满，能马上扫码参与答题赢礼品！

  标本固定是组织处理最重要的一步，也是最无法补救的一步。通常选用 10% 中性缓冲 （ph 值 7.2～7.4）做固定，避免酸性或无缓冲对核酸的降解。由于手术或活检组织很可能在手术过程中就已出现血氧供应不足，因此组织需要在离体后 30 分钟内尽快固定。组织标本厚度、溶液的体积、固定时间是影响固定程度的三个重要因素。

  脱水指的是利用脱水剂如不同浓度的乙醇将组织内的水分逐步置换出来，必须要格外注意彻底脱水，避免残留水分导致核酸降解。该步骤通常由脱水机完成，必须要格外注意按时换脱水机中的液体，使用新鲜的、高质量、不经水稀释的试剂，避免水分残留。

  包埋完成后就算大功告成啦，接下来便是存放的问题，QIAGEN 比较了在不一样的温度下储存的样本，发现相较于室温或更高温度，将 FFPE 样本保存在 4 ℃，1 年后 RNA 的完整性更高。

  通常来说，一次 PCR 检测或 NGS 检测需要大标本（组织大小 0.5 × 0.5 c㎡）3 张以上，小标本（组织大小 0.5 × 0.5 c㎡ ）及穿刺组织样本需 6 张以上，切片厚度为 6～10 μm，切片太薄会造成核酸的进一步损伤，切片太厚会造成脱蜡及蛋白酶 K 消化不彻底，降低核酸得率。很多时候 FFPE 样本量太少所得核酸不足以进行下游实验。

  蛋白酶 K 可以消化 FFPE 样本中与 DNA 结合的蛋白质组分，将 DNA 释放开来，并降解样本中有几率存在的任何核酸酶，因此这个步骤还可防止 DNA 发生降解。

  消化的时间过短，DNA 的释放不充分，导致核酸提取的得率低，一般会用 56 ℃ 条件下孵育 1 h，QIAGEN 第二代 FFPE 样本纯化试剂盒QIAamp DNA FFPE Advanced UNG Kit 采用两次蛋白酶K处理，分别是脱蜡后 56 ℃ 孵育 1 h 和逆转交联之后 65 ℃ 处理 15 min，可进一步提升核酸释放率，即使是难裂解的组织样本也不在话下！如样本中核酸得率较低，延长蛋白酶 K 的处理时间也不失为一个解决办法。

  以上就是FFPE 提 DNA 5 个注意点，了解干货内容后快扫码参与有奖答题吧！科研人专属背包、音箱、影视卡，等你拿，先到先得！

  QIAGEN（凯杰）是全球领先的从样本制备到数据解读完整解决方案的供应商，致力于帮助科学家从样本中获得宝贵的分子生物学数据及生物学意义。强大的样品制备技术可从各类样本中纯化获得高品质 DNA、RNA 和蛋白质；提供基于 PCR, digital PCR 以及 NGS 检验测试方案对目标分子进行仔细的检测分析；生物信息学软件和数据库在数据查询以及解读方面提供精准、便捷的强有力支撑。自动化解决方案将上述各步无缝整合，为您提供经济、高效的分子检测工作流程。

  QIAGEN（凯杰）目前在 25 个国家和地区拥有 35 家子公司，并在 60 多个国家和地区拥有全球分销合作伙伴网络。凯杰服务于全球 80 多个国家和地区，超过五十万的客户，帮他们在分子诊断（医疗卫生）、应用检测（法医、疾病预防控制和食品安全）、 制药（制药企业和生物技术公司）和学术研究（生命科学研究）领域获得成功和突破。