春节亲手放过的焰火在师妹的 qPCR 扩增曲线上复现了

发表时间: 2024-03-14 10:27:58 作者: 试剂盒

  比及试验室和师妹梳理完流程吓了一跳,原来是许多 qPCR 试验细节都没注意到:

  关于 qPCR 这类对试验资料以及操作技巧都要求严厉的试验来说,急着赶进展往往得不偿失,其间的细节不注意,试验成果只能「放焰火」。

  为了防止咱们在 qPCR 试验中呈现相似的问题,咱们交心预备了相关干货供咱们学习,帮咱们在试验操作上少走弯路!(文末试用有奖,别错过哦~)

  正常的 qPCR 扩增曲线应为 S 型,抱负的 CT 值范围在 20~30。若呈现 CT 值偏大、无渠道期或渠道期下降等不正常的状况,可测验以下调整:

  ● 若 CT 值偏大,或许是模板量缺乏或基因表达丰度低,主张添加模板量并调查 CT 值是否按预期倍数削减。

  ● 考虑 qPCR 反响条件或引物规划或许不合适,导致扩增功率下降。此刻,可优化反响条件或调整引物规划。

  ● 若置疑 qPCR 系统中存在酶抑制剂,影响酶活性,主张对反响系统进行改进。

  研讨样品中靶标丰度低是遍及的问题。运用适量模板 RNA 至关重要:过多或许会引起特异性下降,过少则或许没办法检出。

  批次效应和复孔重复性差一般源于加样差错,主张定时校准移液器,并经过扩展反响系统或预先制造预混液来来优化,有助于进步试验的准确性和可重复性。

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